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牛C反应 (CRP)酶联免疫阐发

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TSZ
            牛C反应    (CRP)酶联免疫阐发

试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T
35µg/L -1000µg/L
使用目的:
本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中 C反应
(CRP)含量。
尝试道理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛 C  反应
(CRP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次到场  C  反应
白(CRP),再与 HRP标记的  C反应    (CRP)抗体    ,形成抗体-抗原-酶标抗体复合
物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作
用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的  C 反应    (CRP)呈正相关。用酶标仪
(CRP)    。用纯化的牛 C  反

在 450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛   C反应
(CRP)浓
度。
试剂盒组成

标本要

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行尝试。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因   NaN3按捺辣根过

(HRP)活性。

操作步骤

1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

 

 2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准

 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,

然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后37℃温育30分钟。30倍稀释后备用

4.配液:将 30倍浓

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静重复 5次,拍干。

30秒后弃去,如此

6.加酶:每孔到场酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7.温育:操作同 3。

8.洗涤:操作同 5。

9.显色:每孔先到场显色剂 A50µl,再到场显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10分钟.

10. 终止:每孔加终止液    50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止

液后 15分钟以内进行。

操作程序总:

 

 

计算

以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上,按照样品的

OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与  OD值计算出标

 

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有

析出,稀释时可在浴中加温助溶,洗涤时不影响

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每创油分廖测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本  OD值

大于标准品孔孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计

算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验

.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月

  

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