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牛α干扰素(IFN-α)酶联免疫阐发(ELISA)试剂盒使用说明书

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牛α干扰素(IFN-α)酶联免疫阐发(ELISA)试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T
1ng/L -35ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中 α干扰素(IFN-α)含量。
尝试道理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛 α干扰素(IFN-α)水平。用纯化的牛   α干扰素
(IFN-α)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次到场 α干扰素(IFN-α),
再与 HRP标记的  α干扰素(IFN-α)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗
涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终
的黄色。颜色的深浅和样品中的 α干扰素(IFN-α)呈正相关。用酶标仪在  450nm波长下测定
吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛  α干扰素(IFN-α)浓度。
牛α干扰素(IFN-α)酶联免疫阐发(ELISA)试剂盒组成

标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行尝试。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因   NaN3按捺辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,
96T然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
4.配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水  30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此
重复 5次,拍干。
6.加酶:每孔到场酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先到场显色剂 A50μl,再到场显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液    50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
牛α干扰素(IFN-α)酶联免疫阐发(ELISA)试剂盒操作程序总结:

计算
以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,按照样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与  OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好
控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每创油分廖测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本  OD值
大于标准品孔di一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
牛α干扰素(IFN-α)酶联免疫阐发(ELISA)试剂盒保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月

 

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