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大鼠 (Rat) 白细胞介素-1β(IL-1β)ELISA 检测试剂盒

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大鼠 (Rat) 白细胞介素-1β(IL-1β)ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用  标本:血清或血浆

试验道理:
IL-1β试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附尝试(ELISA).已知IL-1β浓度的标准品、未知浓度的样品到场微孔酶标板内进行检测。先将IL-1β和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,到场亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后到场底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-1β的浓度呈比例关系。

大鼠 (Rat) 白细胞介素-1β(IL-1β)ELISA 检测试剂盒内容及其配制


自备材料

1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。

安全性
1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2.尝试中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴汲取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项
1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.尝试中不用的板条应马上放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,汲取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。尝试完成后应马上读取OD值。
8.到场试剂的按次应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及按次进行温育操作。

大鼠 (Rat) 白细胞介素-1β(IL-1β)ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不马上使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备
1.标准品:标准品的系列稀释应在尝试时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

操作步骤
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时到场大量的气泡,产生加样上的误差。
2.按照待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品按照自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.到场稀释好后的标准品50ul于反应孔、到场待测样品50ul于反应孔内。马上到场50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔到场80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔到场底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速到场50ul终止液,到场终止液后应马上测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的尝试方案


局限

6号标准品以上的结果为非线性的,按照此标准曲线无法得到精确的结果。

大鼠 (Rat) 白细胞介素-1β(IL-1β)ELISA 检测试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的IL-1β标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的IL-1β含量可按照其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围:0-240pg/ml

4、敏感度: 0.1 pg/ml

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