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大鼠钩端螺旋体(Lep)酶联免疫阐发试剂盒使用说明书

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大鼠钩端螺旋体(Lep)酶联免疫阐发试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
96T
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中钩端螺旋体(Lep)表达。
尝试道理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠钩端螺旋体(Lep)表达。用纯化的大鼠钩端螺旋体(Lep)抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中钩端螺旋体(Lep)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的钩端螺旋体(Lep)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中大鼠钩端螺旋体(Lep)的存在与否。
大鼠钩端螺旋体(Lep)酶联免疫阐发试剂盒组成 

标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行尝试。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3按捺辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2.加样:分别在阴、阳性对照孔中到场阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔到场酶标试剂50μl,空白孔除外。 
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先到场显色剂A50μl,再到场显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
大鼠钩端螺旋体(Lep)酶联免疫阐发试剂盒操作程序总结:

计算和结果判定:
注意事项
1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。
大鼠钩端螺旋体(Lep)酶联免疫阐发试剂盒保存条件及有效期
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月

 

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